SILAC(Stable Isotope Labeling with Amino acids in Cell culture)即细胞培养中氨基酸的稳定同位素标记技术。与TMT/iTRAQ不同,SILAC属于体内标记技术,更加贴近样品的真实状态,标记效率高达100%,且标记稳定性优异。该技术特别适用于全细胞蛋白的分析以及膜蛋白的鉴定与定量,每个样本仅需几十微克蛋白。基于SILAC技术,科学家们可以开展差异表达蛋白质组、蛋白质翻译后修饰、药物蛋白质组以及蛋白质互作等多方面的研究。
1、标记效率高:活细胞水平标记,标记效果稳定,标记效率高达100%
2、定量重复性好:蛋白质组在样品处理前被引入,降低由于后续样品制备等造成的实验误差,定量精确
3、高灵敏度:样本需求量少,通常每个样品只需要几十微克的蛋白量
4、高通量:在一次实验中最多可同时比较8个样品
5、活体标记:接近样品真实状态
6、相容性:对多种培养基中的多种细胞进行标记
SILAC的实验流程是在细胞培养基中加入轻、中或重型稳定同位素标记的必需氨基酸(赖氨酸和精氨酸),通过细胞的正常代谢,使新合成的蛋白带上稳定同位素标签。等量混合各类型蛋白质,酶解后进行质谱分析。通过比较一级质谱图中同位素峰型的面积大小进行相对定量,同时二级谱图对肽段进行序列测定从而进行蛋白鉴定。